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微生物计数

3.滤膜法

滤膜法是当样品中菌数很低时，可将一定体积的湖水、海水或饮用水灯样品通过膜过滤器。然后将滤膜干燥、染色，并经处理使膜透明，再在显微镜下计算膜上(或一定面积上)的-数。

此法也可以通过培养观察形成的菌落数来推算样品中的菌数。食品安全-历史证明，随着社会发展，-不断完善，在解决或基本解决食品添加剂的添加之后，食源病原微生物引发的食品安全问题就-。例如测定饮用水中大肠gan菌的数目:将已知体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养基上培养。在该培养基上大肠gan菌的菌落呈现黑色，可根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中大肠gan菌的数目。

此法也是统计样品中活菌的数目。

4.比浊法

原理是在一定范围内，菌是悬液中细胞浓度与混浊度成正比，即与光密度成正比，菌越多，光密度越大。因此可借助与分光光度计，在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度表示菌量。实验测量时一定要控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内，否则不准确。

5.显微镜直接计数法

在课本生物选修1生物技术实践p22中“除了上述活菌计数法外，显微镜直接计数也是测定微生物数量的常用方法。13-2012食品安全标准食品微生物学检验产气荚膜梭菌检验gb4789。”这里说的显微镜直接计数，我认为应该是在稀释涂布的基础上不培养成菌落而通过染色的方法在显微镜下直接计数。再如滤膜法也一样，可以有两种情况。

另外，微生物计数法发展迅速，多种多样的快速、简易、自动化的仪器和装置等方法可以用来统计微生物的数目。

微生物限度检查

   3mpn法 mpn法的精密度和准确度不及薄膜过滤法和平皿计数法，仅在供试品需氧菌总数没有适宜计数方法的情况下使用，本法不适用于霉菌计数。若使用mpn法，按下列步骤进行。

   取照上述“供试液的制备”“接种和稀释”和“抗jun活性的去除或灭活”制备的供试液至少3个连续稀释级，每一稀释级取3份1ml分别接种至3管装有9～10ml胰酪大豆胨液体培养基中，同法测定菌液对照组菌数。注：有所接种必须无菌操作培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具(如接种针和吸管等)在无菌条件下接种含菌材料(如样品、菌苔或菌悬液等)于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。-时可在培养基中加入表面活性剂、中和剂或灭活剂。

   接种管置30～35℃培养3天，逐日观察各管微生物生长情况。3、穿刺接种在保藏yanyangjunzhong或研究微生物的动力时常采用此法。如果由于供试品的原因使得结果难以判断，可将该管培养物转种至胰酪大豆胨液体培养基或胰酪大豆胨琼脂培养基，在相同条件下培养1～2 天，观察是否有微生物生长。根据微生物生长的管数从表3查被测供试品每1g或每1ml中需氧菌总数的可能数。

微生物限度检测方法主要包括3种。      

1.微生物计数法：该种检测方法用于能在有氧条件下生长的嗜温-和-的计数。本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物限度标准。液体培养：在实验中，通过液体培养可以使微生物迅速繁殖，获得大量的培养物，在一定条件下，还是微生物选择增菌的有效方法。检验项目分别为：需氧菌、霉菌及酵母菌计数。其中，需氧菌计数方法适用性试验：铜绿假单胞菌、金黄色、枯草芽孢。霉菌及酵母菌计数方法适用性试验：白色、黑曲霉。      

2.控制菌检查法：控制菌检查法系用于在规定的试验条件下，检査供试品中是否存在特定的微生物。接种、培养是食品微生物应用、研究过程中基本和必不可少的方法。分别为培养基适用性检查和控菌检查方法适用性试验。控制菌计数方法适用性试验：耐胆盐革兰阴性菌、大肠埃希氏菌、沙门氏菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄菌、梭菌、白色。      

3.方法学适用性试验：-的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的微生物计数。  

配制培养基注意事项

1.灭菌时严格按照规定加热、加压，切忌时间过长压力过高，否则会造成营养成分的破坏。

2.切忌使用铜锅、铁锅配制培养基。

3.培养基不能二次高压灭菌。

4.划线用培养基可放入冰箱或培养箱除去水分。  

无菌操作注意事项

1.进入无菌室之前-行空气消毒，工作人员进入无菌室以前，必须于缓冲间更换消毒过的工作服、工作帽及工作鞋。

2.动作要轻，尽量减少走动，以免搅动空气。

3.操作要靠近酒精灯火焰区，使用吸管要用吸球。

4.接种环/接种针用前用后进行火焰灭菌。

5.工作结束作好终末消毒，所有培养物均应高压灭菌后再扔掉，以免污染环境。